Лабораторная диагностика

Таблица 3 Антибиотики, рекомендуемые для оценки чувствительности

Pseudomonas aeruginosa

Для Pseudomonas aeruginosa достаточно стандартизирован дискодиффузионный метод, который является разновидностью диффузионного метода, тогда как для других неферментирующих бактерий предпочтение следует отдавать методам серийных разведений. Дискодиффузионный метод основан на регистрации диаметра зоны ингибиции роста исследуемого микроорганизма вокруг круглого носителя антибиотика - бумажного диска. Постановка дискодиффузионного метода оценки антибиотикочувствительности включает следующие этапы:

приготовление питательных сред;

приготовление суспензии микрорганизма и инокуляцию;

наложение дисков и инкубацию;

учет результатов.

Еще одна разновидность диффузионного метода - эпсилометрический метод (Е- тест). В качестве носителя используется узкая полоска, пропитанная различными концентрациями антибиотика от минимальных до максимальных. Результатом диффузии антибиотика в среду является образование вокруг носителя каплевидной зоны ингибиции роста. Величину МПК учитывают в том месте, где граница зоны игибиции роста вплотну подходит к носителю.

Метод удобный и простой в постановке, недостатком эпсилометрического метода является дорогая стоимость полосок с нанесенными концентрациями антибиотиков, поэтому чаще используется в научно-исследовательских и экспериментальных лабораториях.

Серологический метод. При поражении внутренних органов, пневмониях, при многих затяжных внутрибольничных инфекциях выделение и идентификация возбудителя бактериологическим методом затрудняется. В этих случаях проводят серологическую диагностику. Серологический метод основан на обнаружении специфических антител в сыворотке крови. Для этого упациента забирают 5-10 мл перифирической крови в пластиковые или стеклянные пробирки. Диагностическая ценность явления нарастания титра антител не вызывает сомнения. В последнее время широкое распространение получил иммуноферментный метод исследования сыворотки крови, позволяющий при определенной его постановке определять как антитела, так и специфические антигены. Существует метод латекс-агглютинации для обнаружения водорастворимых антигенов слизи синегнойной палочки наиболее распространенных серотипов. Общим недостатком этих методов является вариабельность результатов, зависящая от сероваров культур синегнойной палочки. Поэтому перспективными представляются исследования, направленные

на поиск общевидового антигена возбудителя, пригодного для создания специфических диагностикумов.

ПЦР - диагностика. В последние годы метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) занимает одно из ведущих мест в современной лабораторной диагностике. Чувствительность и специфичность метода достигают 90 100%, это позволяет гарантированно обнаруживать в биологическом материале единичные клетки возбудителя. Так же для ПЦР характерно короткое время исследования от

2 до 5 часов, что является большим преимуществом по сравнению с бактериологическим методом. Полимеразная цепная реакция является "золотым стандартом" для диагностики многих инфекций, проверена временем и тщательно апробирована клинически. Показания к применению этого метода начинаются там, где возникают противопоказания к применению классических микробиологических методов. Материалом для исследования может быть: культура бактерий, нуклеиновые кислоты, выделенные из клеток, биологические жидкости, а так же объекты внешней среды. Взятие материала для анализа производится только одноразовыми зондами в пластиковые пробирки типа "Эппендорф" одноразового использования со стерильным физиологическим раствором или антикоагулянтом. Метод ПЦР-диагностики все более широко внедряемый в лабораторную практику, позволяет проводить прямое обнаружение ДНК или РНК возбудителя, что поднимает лабораторную диагностику на принципиально другой уровень.