Определение гликозаминогликанов
При всех МПС происходит накопление ГАГ. В тканях человека идентифицировано 9 типов ГАГ, различающихся по своей первичной структуре, по типу связывания с белком и распределением по тканям.
Количественный и качественный анализ ГАГ применяется для первого этапа диагностики МПС.
Для количественного анализа ГАГ наиболее чувствительным и специфичным является спекторофотометрический анализ с диметиленовым синим (DMB). Необходимо отметить, что количество ГАГ – возраст-зависимый показатель. У детей экскреция ГАГ более высокая, с возрастом она снижается. Этот тест может давать ложноотрицательные результаты при некоторых МПС ( МПС IV и при легких формах МПС I, VI). Поэтому сочетание количественного и качественного анализа строго рекомендуется при проведении анализа ГАГ. Качественный анализ ГАГ проводят с применением тонкослойной хроматографии или электрофореза. Для этих тестов необходимо предварительное выделение ГАГ. Для разных форм МПС характерен свой профиль ГАГ. Одно из основных ограничений метода – трудности в детекции кератансульфата при МПС IV типа, что приводит к ложноотрицательным результатам. Следует обратить внимание, что у детей раннего возраста и при мягких форах МПС экскреция патологичных ГАГ не выражена, и результаты трудны для однозначной интерпретации даже специалистами с большим опытом. Второе ограничение метода – невозможность применить его для широкомасштабных скрининговых исследований, так как сбор и последующая транспортировка образцов мочи в лабораторию затруднительна.
Недавно был описан подход к одновременному и качественному, и количественному определению разных ГАГ с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии (LC-MS/MS). Положительным преимуществом метода является высокая чувствительность, что позволяет определять ГАГ в моче, плазме, цереброспинальной жидкости и даже в пятнах высушенной крови. Одно из ограничений – трудности точного определения кератансульфата в биологических жидкостях (кроме мочи). Это новый метод в ближайшее время может заменить другие подходы к определению ГАГ и возможно будет применен не только для мониторинга лечения, но и для проведения скрининговых обследований на МПС.