2.3.2 Специфическая лабораторная диагностика
Рекомендуется пациентам с подозрением на ПГ или установленным диагнозом ПГ (на амбулаторном этапе по клинико-эпидемиологическим показаниям, в стационаре – всем пациентам) с целью установления этиологии заболевания или дифференциальной диагностики [2,3,5,24,25,32,33,34,36,39,48,50,52,56,72,73,74,75,76,77,78,79,80]:
- определение ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), качественное исследование [2,3,5,24,25,32,33,34,36,39,48,50,52,56,72,73,74,75,76,77,78,79,80].
- определение ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), количественное исследование [2,3,5,24,25,32,33,34,36,39,48,50,52,56,72,73,74,75,76,77,78,79,80].
- определение ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в везикулярной жидкости, соскобах с высыпаний на слизистых оболочках и коже методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), качественное исследование [2,3,5,24,25,32,33,34,36,39,48,50,52,56,72,73,74,75,76,77,78,79,80].
- определение ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в везикулярной жидкости, соскобах с высыпаний на слизистых оболочках и коже, количественное исследование [2,3,5,24,25,32,33,34,36,39,48,50,52,56,72,73,74,75,76,77,78,79,80].
- определение ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в слюне методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), качественное исследование [2,3,5,24,25,32,33,34,36,39,48,50,52,56,72,73,74,75,76,77,78,79,80].
- определение ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в слюне методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), количественное исследование [2,3,5,24,25,32,33,34,36,39,48,50,52,56,72,73,74,75,76,77,78,79,80].
- определение ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в моче методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), качественное исследование [2,3,5,24,25,32,33,34,36,39,48,50,52,56,72,73,74,75,76,77,78,79,80].
- определение ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в моче методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), количественное исследование [2,3,5,24,25,32,33,34,36,39,48,50,52,56,72,73,74,75,76,77,78,79,80].
Комментарии: биологический материал (например, содержимое везикул и/или соскобы со слизистых оболочек и кожи и/или биологические жидкости и секреты организма (кровь, слюна, моча и др.)) подлежит исследованию в зависимости от клинической картины, данных анамнеза; при получении биологического материала следует учитывать возможное многоочаговое инфицирование [2,5,72,73,74,75,76,77,78,79].
Выявление ДНК ВПГ-1/-2 (Herpes simplex virus types 1, 2) в соскобах со слизистых оболочек полости рта, в отделяемом пузырьковых высыпаний (везикул) и эрозивноязвенных поражений кожи с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) является методом выбора [2,74,75,78,80]. Несомненную ценность имеет определение количества ДНК ВПГ-1/-2 (Herpes simplex virus types 1, 2) методом ПЦР в режиме реального времени, результаты исследования можно использовать как с диагностической целью, так и для выявления показаний к назначению супрессивной противовирусной терапии или для оценки эффективности лечения [2,3,5,19,20,29,32,33,48,49,50,70,72,73].
Особое значение метод ПЦР-диагностики имеет: при первичном инфицировании в стадии «серологического окна» до начала синтеза антител, когда выявление ДНК ВПГ -1/-2 (Herpes simplex virus types 1, 2) в крови является единственным маркером активной репликации вируса; при асимптомном герпесе, когда заболевание не имеет явной клинической картины, но патологические процессы присутствуют, и больные, выделяя вирус при контактах, инфицируют партнеров [2,3,5,28,37,72,77,78,79,80]. ПЦР-исследование может использоваться также для дифференциальной диагностики ВПГ-1 и ВПГ-2 (Herpes simplex virus type 1, type 2) [2,22,26,41,78,79].
У больных ПГ с эпизодами низкой эффективности ПВТ в анамнезе показано исследование биологического материала (содержимого везикул и/или соскобов со слизистых оболочек и кожи и/или биологических жидкостей и секретов организма в зависимости от клинической картины), молекулярно-генетическими методами для обнаружения специфических фрагментов ДНК ВПГ-1 и/или ВПГ-2 (Herpes simplex virus types 1, 2) и определения вирусной нагрузки (ПЦР: количественный тест), для исключения мутаций лекарственной устойчивости вируса к противовирусным препаратам системного действия из группы: нуклеозиды и нуклеотиды, кроме ингибиторов обратной транскриптазы (код АТХ: J05AB) [2,3,4,5,29,49,50].
На чувствительность исследования могут влиять различные ингибирующие факторы, вследствие чего предъявляются строгие требования к взятию клинического материала, к условиям его хранения/транспортировки, к организации и режиму работы лаборатории для исключения контаминации клинического материала [2,3,4,5,72,78].
В ряде случаев для подтверждения этиологии заболевания и определения чувствительности вируса к противовирусным препаратам системного действия возможно применение вирусологического метода, основанного на выделении вируса (Herpes simplex virus type 1, type 2) из биологического материала (например: содержимого везикул, соскобов со слизистых оболочек и кожи, крови, СМЖ и др.) на чувствительных культурах клеток с его последующей идентификацией и определением чувствительности к противовирусным препаратам системного действия из группы: нуклеозиды и нуклеотиды, кроме ингибиторов обратной транскриптазы [2,4,5,78,79,80].
Рекомендовано пациентам при подозрении на Простой герпес (на амбулаторном этапе по клинико-эпидемиологическим показаниям, в стационаре – всем больным) или при подозрении на Простой герпес и отрицательными результатами исследованиями биологического материала молекулярно-биологическими методами [2,3,5,75,78] или при подозрении на Простой герпес и невозможностью проведения молекулярно-биологического исследования или с рецидивирующим ПГ с атипичной клинической картиной и др. [2,3,5,25,28,29,34,36,39,48,50,52,53,61,62,74,76,81,82,83,84,85]:
- определение антител (АТ) классов М (IgM) и/или G (IgG) к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) методом иммуноферментного анализа (ИФА) [2,3,5,25,28,29,34,36,39,48,50,52,53,61,62,74,76,81,82,83,84,85]:
- определение антител класса М (IgM) к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1,2) в крови [2,3,5,25,28,29,34,36,39,48,50,52,53,61,62,74,76,81,82,83,84,85].
- определение антител класса G (IgG) к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1,2) в крови [2,3,5,25,28,29,34,36,39,48,50,52,53,61,62,74,76,81,82,83,84,85].
- определение антител класса G (IgG) к вирусу простого герпеса 1 типа (Herpes simplex virus types 1) в крови [2,3,5,25,28,29,34,36,39,48,50,52,53,61,62,74,76,81,82,83,84,85].
- определение антител класса G (IgG) к вирусу простого герпеса 2 типа (Herpes simplex virus types 1) в крови [2,3,5,25,28,29,34,36,39,48,50,52,53,61,62,74,76,81,82,83,84,85].
Комментарии: наибольшее диагностическое значение имеет детекция антител класса M (IgM) к ВПГ-1/-2 (Herpes simplex virus types 1, 2), как показателя активности процесса – их выявление свидетельствует об остром заболевании, реинфекции, суперинфекции или реактивации [2,3,4,5,7,19,20,21,28,77,81]. Однако в клинически выраженных случаях, в т. ч. при типичном течении ПГ, специфические антитела IgM к ВПГ выявляют редко (в 3 – 6% случаев). Лабораторным критерием, подтверждающим клинический диагноз ПГ, является нарастание титра специфических антител IgG к ВПГ в 4 и более раз в течение 10 - 14 дней (метод парных сывороток) [2,3,4,5,7].
Проведение серодиагностики показано также при обследовании половых партнеров пациентов, один из которых является серонегативным по отношению к ВПГ. При получении дискордантных результатов серологических исследований у половых партнеров проводят консультирование о возможностях контроля и снижения риска передачи вируса [1,2,3,4,5,32,33,34,37].
У реципиентов органов и тканей определяют серостатус – проводят определение антител класса G (IgG) к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2), до трансплантации для соответствующей стратификации риска после трансплантации [2,3,29,49,50].
У больных ПГ при появлении неврологических симптомов наряду с определением антител (АТ) классов М, G (IgM, IgG) к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в сыворотке крови одновременно проводят определение антител (АТ) классов М, G (IgM, IgG) к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в спинномозговой жидкости в динамике (у 5% больных герпетический энцефалит обусловлен инфицированием ВПГ-2) [53,61,62,64,66].
Определение авидности антител класса G (IgG) к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus type 1,2) несет низкую информационную нагрузку: реактивация при клинически выраженных случаях сопровождается наличием высокоавидных антител [2,4,5].
Рекомендовано пациентам с Простым герпесом по клиническим показаниям при наличии общемозговой и/или очаговой неврологической симптоматики или при подозрении на воспалительное поражение головного мозга:
- выполнить общий (клинический) анализ спинномозговой жидкости, микроскопическое исследование спинномозговой жидкости, подсчет клеток в счетной камере (определение цитоза), определение крови (эритроцитов) в спинномозговой жидкости, определение уровня белка в спинномозговой жидкости, исследование уровня хлоридов в спинномозговой жидкости, исследование уровня лактата, исследование уровня глюкозы в спинномозговой жидкости и биохимическое исследование спинномозговой жидкости [2,3,39,41,42,48,53,54,61,62,64,65,66,67,68].
Комментарии: для установления этиологии заболевания на острой стадии заболевания требуется взятие спинномозговой жидкости (СМЖ) (если позволяет внутричерепное давление(!) или нет иных клинических противопоказаний) с последующим клиническим, биохимическим исследованием СМЖ, подсчетом клеток в счетной камере (определение цитоза) [53].
Исследование СМЖ позволяет определить: уровень общего белка (исследование уровня белка в спинномозговой жидкости), глюкозы (исследование уровня глюкозы в спинномозговой жидкости), хлоридов (исследование уровня хлоридов в спинно-мозговой жидкости), цитоз (микроскопическое исследование спинномозговой жид-кости, подсчет клеток в счетной камере (определение цитоза)).
У лиц с подозрением на ВПГ-энцефалит в СМЖ возможно выявление повышенного уровня белка, лимфоцитарного или смешанного плеоцитоза, ксантохромии, примеси эритроцитов. Примерно у 5-10% взрослых с доказанным ВПГ-энцефалитом исходные показатели ликвора могут быть нормальными, без плеоцитоза [53]. ВПГ-энцефалит может быть геморрагическим, и количество эритроцитов в ликворе повышено примерно в 50% случаев [53].
выполнить определение ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в спинномозговой жидкости методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) качественное исследование и/или определение ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) в спинномозговой жидкости методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) количественное исследование [2,3,39,41,42,48,53,54,61,62,64,65,66,67,68,86].
Комментарии: исследование спинномозговой жидкости (СМЖ) методом ПЦР является «золотым» стандартом диагностики ВПГ-энцефалита или менингита или менингоэнцефалита с чувствительностью 98% и специфичностью 100% [53,86]. У 5-10% взрослых с доказанным ВПГ-энцефалитом результаты первичного исследования СМЖ на ВПГ методом ПЦР могут быть отрицательными в первые несколько дней заболевания [53]. У пациентов с подозрением на ВПГ-энцефалит рекомендуется повторять исследование СМЖ методом ПЦР на ВПГ через 3-7 дней в не диагностированных случаях, при которых имеются клинические признаки или нейровизуализационные признаки заболевания [39,52,53,57,65,66,68,86]. У больных ПГ с неврологическими симптомами результаты ПЦР-исследования могут оставаться положительными в течение как минимум 5 дней после начала терапии ацикловиром** [39,52,53,57,65,66,68,86].
выполнение серологического исследования спинномозговой жидкости с определением антител (АТ) класса М, G (IgM, IgG) к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (Herpes simplex virus types 1, 2) методом иммуноферментного анализа (ИФА) [39,52,53,57,65,66,68]: